油红O染色液(细胞专用)说明书

染色液(细胞专用)说明书货号：G1262有效期:12个月产品内容：名称4×20ml4×50mlStorage试剂(A):OROFixative20ml50mlRT避光试剂(B):OROStainB1:OROStainA12ml30ml4℃避光B2:OROStainB8ml20mlRT按B1:B2=3:2比例混合静置10min,即为OROStain，不宜提前配制；配好后，若有沉淀，过滤之后再使用。试剂(C):Mayer苏木素染色液20ml50ml4℃避光试剂(D):OROBuffer20ml50mlRT产品说明：脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料，最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂，较易与甘油三脂结合呈小脂滴状，与磷脂结合力稍差，其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在细胞内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大，所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。油红O染色液(细胞专用)简称ORO染色液，可显示最小的脂滴，可优先为脂类从溶剂中吸附染料。标本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福尔马林)。脂肪阳性染色结果呈橘黄至红色，但具体颜色因脂质浓度而定。自备材料：60%异丙醇、蒸馏水页操作步骤(仅供参考)：一、培养细胞1、移除细胞培养基，用PBS洗两次，加OROFixative固定液固定20-30min。2、弃去固定液，用蒸馏水洗2次。3、加入60%异丙醇浸洗5min。4、弃去60%异丙醇后加入新配制好的OROStain，浸染10-20min。5、弃去染色液，水洗2-5次，直到无多余染液。6、加入Mayer苏木素染色液，复染核1-2min。弃去染液后水洗2-5次。7、入OROBuffer1min，弃去。8、加入蒸馏水覆盖细胞并在显微镜下观察。二、细胞涂片1、制备新鲜骨髓、血液涂片，入OROFixative固定10～15min。2、取出涂片，放于流通的空气中10～15min。3、入新配制好的OROStain，浸染15min。4、入60%异丙醇漂洗20～30s，流水冲洗，入蒸馏水稍微清洗。5、入Mayer苏木素染色液，复染核2min。6、入OROBuffer1min。染色结果:中性脂肪橙红色或橘红色磷脂粉红色细胞核蓝色注意事项:1、ORO染色液不够稳定，易产生沉淀，不宜提前配制。2、Mayer苏木素染色液复染时间不能过长。、染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。