石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅的含量

石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅的含量马璐石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅的含量实验目的实验原理及意义实验步骤及方法注意事项实验报告实验目的1.了解石墨炉原子吸收法检测血铅的基本原理。2.理解血铅的测定在职业铅中毒诊断和职业性健康检查中的意义。3.了解不同基体改进剂对石墨炉原子吸收法测定血铅的影响。实验原理职业性慢性铅中毒：由于接触铅烟或铅尘所致的以神经、消化、造血系统障碍为主的全身性疾病铅的代谢及分布铅尘、铅烟肺血液（红细胞、血浆）骨骼肝、肾、脑尿液铅中毒线粒体卟啉代谢紊乱δ-氨基-r-酮戊酸（ALA)血原卟啉（FEP)血锌原卟啉(ZPP)血红素合成抑制神经系统：周围神经病中毒性脑病消化系统：腹绞痛血液系统：贫血点彩红细胞血管、肾脏：牙龈铅线Fanconi中毒诊断血铅≥2.9μmol/L(0.6mg/L、600μg/L)轻、中、重铅中毒实验室诊断指标职业接触限值诊断值血锌原卟啉(ZPP)μmol/L(μg/gHb)2.91(13.0)血原卟啉(EP)μmol/L(μg/L)3.56(2000)血铅(PbB)μmol/L(μg/L)1.9(400)2.9(600)尿铅(PbB)μmol/L(μg/L)0.34(70)0.58(120)尿δ-氨基-r-酮戊酸(ALA)μmol/L(μg/L)61.0(8000)结合职业接触史、作业环境调查、临床表现作出诊断（GBZ37-2019)观察对象血铅≥1.9μmol/L(0.4mg/L、400μg/L,)石墨炉原子吸收法----血铅基本原理：血液经硝酸处理后进入石墨炉原子化器中进行原子化，被测元素（Pb）形成基态原子蒸气；铅空心阴极灯辐射出的特征谱线283.3nm通被基态原子态吸收，生成相应吸光度值；在一定实验条件下，其吸光度与试样中的铅浓度成正比，据此进行血液中铅的定量分析。石墨炉原子吸收法----血铅基本步骤：干燥灰化原子化（收集信号）氩气（保护、清除基体蒸汽及杂质）调整气流量、温度、持续时间对试验条件进行优化石墨炉原子吸收法----血铅基体改进剂作用：保护被测物质消除基体干扰血铅：TritonX-100、磷酸二氢铵意义及应用血液中95%的铅在红细胞中，其浓度与机体铅吸收、分布、排出处于平衡状态当生活或生产环境不变，铅暴露基本稳定的情况下，血铅不仅反映了近期的铅接触水平，也一定程度上作为内暴露水平反映体内的铅负荷采样方便、不易污染、灵敏度高，血铅常被用于反映铅对人体危害的指标实验器材与试剂仪器：原子吸收分光光度计（有石墨炉原子化器和背景校正装置）；铅空心阴极灯；器材：15ml、1.5ml离心管；肝素钠抗凝真空采血管烧杯、100ml容量瓶、移液管、胶头滴管、移液枪（1ml及200ul)及枪头试剂：血样；铅标准储备液（1.00mg/ml），硝酸（G.R）；TritonX-100（G.R）；磷酸二氢铵溶液（A.R）；高纯水。实验方法与步骤（一）溶液配制铅标准应用液、基体改进剂、血铅标准液实验方法与步骤铅标准应用液配制（已配好）1.00mg/ml的铅标准储备液用1%的硝酸稀释为：1mg/LPb标准应用液I，0.1mg/L的Pb标准应用液II。实验方法与步骤基体改进剂基体改进剂1100ml溶液含0.1%TritonX-100（WS/T20-2019），0.1%硝酸基体改进剂2100ml溶液含0.2%磷酸二氢铵，0.3%TritonX-100，0.1%硝酸实验方法与步骤血铅标准液配制（基体改进剂---血液---Pb标准液）分别用基体改进剂1、基体改进剂2配置两组血铅的标准溶液，浓度分别为0，10，,20，40，80，μg/LPb标准溶液浓度（μg/L）010204080血液（μl）100100100100100Pb标准应用液I（μl）0004080Pb标准应用液II（μl）010020000基体改进剂（μl）900800700860820实验方法与步骤（二）被测样品制备1.采用肝素钠抗凝真空采血管采集被测血样，混匀后保存于4°C冰箱；2.吸取100μl血样分别加两种基体改进剂，稀释至1ml，充分混匀，配成血液检测样，分别储存于1.5ml离心管中备用。实验方法与步骤（三）样品检测1.选定被检测元素，设置检测条件及参数；2.对血铅标准液进行测定，得出吸光度值并拟合标准曲线；3.对样品进行检测，将吸光度值与标准曲线进行比对，得出血液检测液浓度。实验方法与步骤序号操作步骤温度（°C）持续时间(s)气体流量(L/min)1干燥1601.00.32干燥290400.33干燥3120100.34灰化13500.20.35灰化2650100.36灰化36505.00.07原子化20000.90.08原子化20003.00.09清除26000.30.310清除26005.00.3信号收集读数样品检测注意：样品检测前，清洗清洁池及进样管；进样程序开始前，先对石墨管进行空烧，排除上次检测的余样，减少干扰；上样前需将样品充分混匀，减少测量误差实验方法与步骤结果分析1.绘制血铅的标准曲线，得出标准方程式2.样品的吸光度值减去试剂空白的吸光度值，由标准曲线算得的浓度即为稀释血样中的铅浓度c0（μg/L）。3.血样中铅的浓度：c=c0*s注意事项所有实验使用的器皿都用20%硝酸浸泡48h，然后依次用去离子水和高纯水冲洗，晾干备用；血样采集、运输、保存及配置过程中也应避免铅污染；操作时，避免实验器皿触碰到皮肤及桌面，以防止外源的铅污染，影响实验结果；正确使用移液枪，精准加样；如果血样含铅量超出标准曲线的测定范围，可增加稀释倍数。实验分组及分工全班分两个组（12人/组）组1：基体改进剂1基体改进剂1作为溶剂的血铅标准液及被测血样的稀释组2：基体改进剂2基体改进剂2作为溶剂的血铅标准液及被测血样的稀释注：每组2份被测血样，分别来自不同的受检个体实验结果全班共享，两组对实验结果进行整合及比较，完成结果讨论及分析实验报告实验目的实验方法：简单叙述操作步骤实验结果1.绘制标准曲线，计算样品含铅浓度；2.根据国家职业卫生标准对被测者血铅浓度进行初步评价及诊断；若要确诊，还需哪些资料的补充？3.讨论：加入基体改进剂对血铅的测定有什么影响？实验试剂的配制基体改进剂基体改进剂1100ml溶液含0.1%TritonX-100（WS/T20-2019），0.1%硝酸基体改进剂2100ml溶液含0.2%磷酸二氢铵，0.3%TritonX-100，0.1%硝酸检测样品配制吸取100μl血样加入基体改进剂，稀释至1ml，充分混匀，配成血液检测样，分别储存于1.5ml离心管中备用Pb标准溶液浓度（μg/L）010204080血液（μl）100100100100100Pb标准应用液I（μl）0004080Pb标准应用液II（μl）010020000基体改进剂（μl）900800700860820血铅标准品配制谢谢！