INVSC1酿酒酵母菌株使用说明

INVSC1酿酒酵母菌株  编号  名称  北京华越洋生物NRR01000  INVSC1酿酒酵母菌株  基本信息：  名称：INVSC1酿酒酵母菌株                    规格：300ul甘油菌  储存温度：-­‐80℃  基因组：                  MATa  his3Δ1  leu2  trp1-­‐289  ura3-­‐52/MATα  his3Δ1  leu2  trp1-­‐289  ura3-­‐52  简介：                  INVSC1是酿酒酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。酿酒酵母适宜的生长温度是28-­‐30度，一般使用30度培养，温度超过32度可能导致细胞的死亡。INVSC1酿酒酵母是生长快速的双倍体酵母细胞，是蛋白表达的理想菌株。INVSC1酿酒酵母是His,  Leu,  Trp和Ura营养缺陷型菌株，在缺乏组氨酸，亮氨酸，色氨酸和尿嘧啶的SC  minimal  media中无法生长。INVSC1酿酒酵母是非常理想的蛋白表达菌株，但是不应该用于遗传分析研究，因为该菌株的孢子形成不好。在制作INVSC1酿酒酵母甘油菌的时候，请不要使用4天以上的平板挑菌保存，尽量使用新鲜的平板。INVSC1的配套载体是pYES3/CT,  pYC2,  pYES2系列载体。INVSC1酿酒酵母可在YPD培养基上生长，用电转化的方法可将质粒转入酵母细胞中，用半乳糖诱导蛋白表达。用30%的甘油与培养物混合可保藏菌种。    操作说明：    1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。  2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。    冷冻管开封：  用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。    菌株复溶：  无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml  左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。  菌株复壮：  用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-­‐35℃培养箱中培养24-­‐48h，真菌在23-­‐28℃培养箱中培养24-­‐72h（必要时，可适当延长培养时间）。    菌株传代：  将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl  新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。    注意事项：  1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；  2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；  3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；  4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；  5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；  6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-­‐10%CO2  促进生长；  7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。  8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。    保藏条件：  -­‐20℃保存（复溶液于2-­‐8℃保存）    保藏时间：  2-­‐10  年，应根据菌种状况及时转接