半夏七夜一枝花组织培养设计方案

半夏栽培技术研究设计方案【摘要】半夏既能以种子营有性繁殖，又能以珠芽和实生苗或块茎营无性繁殖。但在自然条件下，上述二者的繁殖系数均不高，且受环境因素影响极大，故借助组织培养技术进行无性快速繁殖已收到人们高度重视，并取得较大成效。至今，以半夏的叶片、叶柄、珠芽、花茎、块茎、根尖及未成熟种子，甚至以叶肉原生质体为外植体，采用液体-固体双培养法和悬浮培养法等，均已培养出了完整的再生植株。【关键词】追肥培土灭菌组织培养移栽本文介绍了以半夏人工栽培为基础，为组织培养提供适合的材料，最后经组织培养快速培养出多株植株幼苗，大大缩短了传统的繁殖时间。【生态学特征】半夏为多年生草，高15CM~30CM。茎块球形或扁球形，直径0.5CM~3.0CM。半夏喜温和潮湿的气候和隐蔽的环境，忌高温、干旱和强光直射。半夏在8°C~10°C时荫芽生长，最宜生长温度为20°C~25°C，30°C以上生长缓慢，超过35°C时地上部倒伏死亡。半夏要求在湿润、肥沃、土层深厚的中性沙壤土种植，土壤粘重不利于根系发育和子半夏的形成。半夏对水分要求较高，因其根系浅，吸水能力较弱，地上部分耐旱能力较差，土壤过于干旱或空气干燥，都影响其地上部分生长，甚至造成枯萎。【整地施肥】应选择有灌溉条件、湿润肥沃、保水保肥力较强、质地疏松、呈中性的砂质土壤种植。地选好后深翻30CM左右。半夏需肥以前中期最多，故应重施基肥，基肥要有机和无机肥混合使用，每亩施入腐熟的鸡粪或其他优质农家肥4000KG，磷酸二铵25KG、磷肥50KG、硫酸钾10KG。半夏宜用铵态氮肥，切忌施用含氯离子的肥料。【田间管理】田间管理是保证半夏丰产的重要措施，在管理上关键要做好水肥管理，早春覆膜，中耕除草，病虫害防治等方面的工作。（1）覆地膜半夏在早春灌水后覆膜有利于提高地温，利于出苗，早出苗有利于前期抗旱。一般覆膜在春分时进行，不宜过早，早覆膜能早出苗但易受晚霜冻害，造成减产。覆膜后待田间有50%出苗时将地膜拱起，当最高气温达25°C时须将膜揭去，转为正常管理，以防止高温引起提早倒苗。（2）施肥管理半夏宜在半干旱半湿润的土壤条件下生长，不能过干或过湿，干旱会造成苗枯死亡，过湿易造成病害的流行。在出苗时前必须灌1次透水，随后及时中耕松土，保持田间半干半湿。高温季节时要注意灌好水，保持土壤湿润，防止干旱倒苗。雨季积水要及时排除，以防块茎腐烂半夏在生长初期根系少，吸收养分不多，一般不追肥。如基肥不足时，苗期可施少量氮肥，促使苗早发，有利于早结子块茎。出苗后一个半月左右，地下块茎迅速生长，需施肥最多，应结合灌溉追肥1~2次，每次每亩地用三元复合肥15~20KG，供块茎膨大的需求。生育后期需肥少，在施足基肥，前中期及时追肥的情况下，后期一般不追肥。中耕除草、摘蕾，半夏整个生育期都要做到及时锄草，保持田间无杂草，中耕深度不超过5CM，避免伤苗伤根。对不需要留种的田块，当植株抽薹时，要分期分批摘除花苞，以减少营养消耗，促进块茎膨大。【组织培养】（1）外植体的采样和表面灭菌选择久晴之后进行外植体的采样，选取植株距地面较高的部位，洁净、无病虫伤害的强壮植株，剪取较幼嫩、生长能力较强的部位，特别是暴露在强烈阳光下的茎、叶，所采样品污染程度一般也较轻，采得的样品应立即妥当收藏，尽量保持其新鲜，迅速带回实验室，进行灭菌处理，因要获得有活力的材料，灭菌不可能很彻底，大多数情况下，污染率为40%~80%。因此，半夏首次接种，以小容量，多数量为宜，尽量分散，互相隔离。（2）愈伤组织的形成与形态分化以块茎为外植体的诱导与培养：取半夏块茎，冲洗干净，刮去外表粗皮，用肥皂水洗净，再用75%乙醇浸泡1~2min，无菌水冲洗4次，在无菌条件下切成2~4mm左右小块，每个三角瓶接种3块外植体，接种培养基为MS+NAA0.2ml/L+2,4-D0.5mg/L，温度24~26°C，光照强度500~1000lx，光照时间为10H，相对湿度75%~80%。接种2天，外植体两端向上翘起，随后其上端切口处膨大。有的叶柄外植体仅上端膨大，下端褪色呈乳白色而失去分生能力。接种4~5天，启动的外植体从膨大处出现瘤状突起，逐渐延及整个外植体边缘，形成愈伤组织，呈淡黄浅绿的不规则团块状。接种15天后，可见从愈伤组织上出现白色绒毛状物，随后绒毛状物中间伸出许多突起，并迅速生长成为密被白色绒毛的细根，稍后在生根的愈伤组织表面分化出绿色的芽点。（3）再生植株的形成块茎愈伤组织继续培养3周后，表面出现淡绿色球形突起，其顶端逐渐长出绿色芽，并生展出单叶，叶柄上无肉眼可见的珠芽。经2个月左右，每块外植体上可长出3~7个小叶片，基部根系粗壮，长达10CM以上。出苗方式：由愈伤组织逐渐形成直径1~3mm形如珠芽的块茎，然后再从小块茎上长出小苗，两者之比为2.1:1.0.再将愈伤组织转入MS+NAA0.1~0.5mg/L+6-BA0.2~2.0mg/L的分化培养基上，1个月左右可长成高5~10cm,根系完整的试管苗。试管苗的生根培养：半夏试管苗移栽成活与否，决定于其不规则的绿色团块组织，即新生小块茎，为了提高其成活率，宜进行生根培养。在半夏试管苗出苗后的10天左右，再转入1/2MS（铁盐浓度不变）+KT1.0mg/L的生根培养基中，琼脂减少到0.5%，蔗糖减少到2%，10天后即可形成根，叶健壮的完整试管苗。（4）炼苗与移栽当半夏试管在苗高4~6CM时，便可在室内打开瓶口炼苗2~3天，然后取出，洗净根系上的培养基，转移到装有蛭石和沙子（1:1）的塑料网筛中，再放置于温室中，温室湿度80%以上，温度15~200C，经过10天左右在移到大田栽培，成活率可达80%以上。移栽后2~3天周长出叶片，通常有4~10片，最大的组织块可长出近30片新叶片。新生叶为卵状心形的单叶，3周后可长出椭圆至披针形的并具3小叶的复叶，且开始在叶柄上形成小珠芽，个别组织块在培养瓶内的叶柄上也可形成小珠芽。当年移栽的试管苗。当年可收获，千粒重约2KG【半夏组织培养影响因素的研究】对前人实验的经验总结以及文献的参考，得出如下结论：1.愈伤组织的诱导中，不同外植体对愈伤组织的诱导效应各不相同，珠芽的愈伤组织诱导率最高，为98%，叶片最低，为46%。但愈伤组织生长质量，以嫩茎段产生的愈伤组织最好，呈投名状，质地疏松；块茎，叶片外植体所产生的愈伤组织结构致密，呈白色；珠芽所产生的愈伤组织结构致密，呈绿白色，且偶有从生珠芽。2.愈伤组织的诱导中，不同基本培养基对愈伤组织的诱导效应各不相同，其中，高盐浓度的培养基有利于愈伤组织的诱导和生长。3.愈伤组织的诱导中，不同种类和水平的激素对愈伤组织的诱导效应，NAA和KT的有无对愈伤组织诱导的影响不大。4.胚状体诱导试验中证明：活性炭对半夏胚状体的诱导有极显著的诱导效应，当培养基中活性炭的浓度在0.1%~0.7%的范围内，胚状体产生数呈指数性增长。参考文献余启高半夏栽培技术研究恩施职业技术学院学报（综合版）2004年第4期