中学植物细胞工程实验

植物细胞工程实验－以烟草叶片的离体再生系统建立为例黄胜琴一、实验目的了解植物离体培养（组织培养）的技术方法。二、原理细胞全能性:每个植物细胞都具有该植物的全部遗传信息，在合适的培养条件下都有发育成完整植株的潜在能力。植物组织培养:在无菌条件下将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体培养在人工配制的培养基上，人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术，也叫离体培养。三、材料与实验用品1、材料：烟草叶片2、用品：灭菌锅、电炉、试剂瓶、容量瓶、烧杯、玻棒、移液管、量筒、精密天平、酒精灯、镊子、解剖刀、果酱瓶、牛皮纸.3、试剂：ＭＳ培养基、蔗糖、琼脂、NaClO、70%酒精、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、NAA、6－BA、.四、方法步骤1．配制培养基:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖３％+琼脂0.7％NAA母液:先用95%乙醇溶解后，再用热水定容。6-BA母液:先用1mol/LNaOH溶解后，再加水定容。2.准备好接种工具、吸水纸、牛皮纸（报纸包好）、滤菌器、空果酱瓶、无菌水（每组各1）3.灭菌：121℃，15-20min4.趁热（65℃）在超净工作台上加入已滤菌的0.1％NaClO（无菌状态）于培养基中。5.接种:选取外植体自来水冲洗75%酒精浸泡30s１０％ＮaClO浸泡6min无菌水冲洗4-5次无菌吸水纸吸干分割成边长为0.8~1cm的正方形火焰上方接种盖紧瓶盖培养贴标签整理桌面接种注意事项1.接种前75%酒精或0.1%新洁尔灭擦手2.接种时尽量不要说话(防交叉污染)3.不要在课室来回走动4.接种工具要勤在火焰上烧；5.接种工具在消毒冷却后才能使用；6.接种工具不能直接放在超净工作台上，应倒立放在工具架上；7.接种工具若不小心碰到带菌的物品，必须重新消毒后才能使用。8.不要用手直接接触无菌的物品。第10天第20天