非酒精性脂肪性肝病病证结合动物模型的研究进展

@wjgnet.com世界华人消化杂志2010年5月18日;18(14):1452-1455ISSN1009-3079CN14-1260/R焦点论坛TOPICHIGHLIGHT非酒精性脂肪性肝病病证结合动物模型的研究进展鞠大宏,赵宏艳,刘梅洁鞠大宏,赵宏艳,刘梅洁,中国中医科学院中医基础理论研究所北京市100700国家科技支撑计划重点基金资助项目,No.2006BAI08B01通讯作者:鞠大宏,研究员,100700,北京市东直门内南小街16号,中国中医科学院中医基础理论研究所病理室[e-mail]电话:[phone]收稿日期:2009-12-31修回日期:2010-04-20接受日期:2010-04-27在线出版日期:2010-05-18AdvancesinanimalmodelsofnonalcoholicfattyliverdiseasethatcombinediseaseandsyndromesDa-HongJu,Hong-YanZhao,Mei-JieLiuDa-HongJu,Hong-YanZhao,Mei-JieLiu,DepartmentofPathology,InstituteofBasicTheoryofChineseMedi-cine,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,ChinaSupportedby:theNationalKeyTechnologyR&DProgramduringthe11thFive-YearPlanPeriod,No.2006BAI08B01Correspondenceto:ProfessorDa-HongJu,DepartmentofPathology,InstituteofBasicTheoryofChineseMedi-cine,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Bei-jing100700,[e-mail]:2009-12-31Revised:2010-04-20Accepted:2010-04-27Publishedonline:2010-05-18AbstractAstheincidenceofobesityandtype2diabetesmellitusincreasesinthegeneralpopulation,nonalcoholicfattyliverdisease(NAFLD)hasbecomeacommonprobleminclinicalpractice.AlthoughgreatadvanceshavebeenmadeinthetreatmentofNAFLDbasedonsyndromedif-ferentiation,syndromesarenotconsideredinanimalmodelsofNAFLD.Thiswillpreventanin-depthinvestigationofthetherapeuticefficacyofChinesemedicineagainstNAFLDandtheunderlyingmechanisms.Here,wewillreviewtherecentadvancesinanimalmodelsofNAFLDthatcombinediseaseandsyndromes.KeyWords:Nonalcoholicfattyliverdisease;Animalmodelcombiningdiseaseandsyndromes;Diabe-tes;ObesityJuDH,ZhaoHY,LiuMJ.Advancesinanimalmodelsofnonalcoholicfattyliverdiseasethatcombinediseaseandsyndromes.ShijieHuarenXiaohuaZazhi2010;18(14):1452-1455摘要随着肥胖和糖尿病的发病率增加,非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)现已成为我国常见的慢性肝病之一,严重危害人民健康.目前中医应用辨证论治方法治疗NAFLD,取得了一定成绩,但NAFLD动物实验研究采用的模型,没有将中医“证”的因素考虑其中,这样的实验研究或将在某种程度上,影响了中医药治疗该病的疗效及其机制的深入探讨.因此,本文对NAFLD病证结合模型的研究作一深入探讨.关键词:非酒精性脂肪性肝病,病证结合动物模型;糖尿病;肥胖鞠大宏,赵宏艳,刘梅洁.非酒精性脂肪性肝病病证结合动物模型的研究进展.世界华人消化杂志2010;18(14):1452-1455引言非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的,以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征.随着肥胖和糖尿病的发病率增加,NAFLD现已成为我国常见的慢性肝病之一,严重危害人民健康[1].目前对于NAFLD的治疗,西医尚无特效疗法,中医应用辨证论治方法治疗NAFLD,取得了一定成绩[2-4].目前开展的中医药治疗NAFLD动物实验研究采用的是病的模型,没有将中医“证”的因素考虑其中,这样的实验研究或将在某种程度上,影响了中医药治疗该病的疗效及其机制的深入探讨.病证结合动物模型一直是这些年来中医药探讨的热点,目前尚未见到关于NAFLD病证结合模型的研究,本文对此作一深入探讨.1NAFLD证型的选择NAFLD在中医古代文献中并没有记载,根据®■背景资料非酒精性脂肪性肝病现已成为我国常见的慢性肝病之一,中医药在治疗该病上取得了一定成绩.辨证论治是中医治疗的特点之一,但是目前的科研并没有将中医“证”的因素考虑其中,本文主要探讨该病与证候相结合的动物模型制作方法,为中医药治疗该病的疗效及机制的深入探讨提供有益参考.■同行评议者徐列明,教授,上海中医药大学附属曙光医院(东部)肝二科;王炳元,教授,中国医科大学附属第一医院消化内科;王富春,教授,长春中医药大学针灸推拿学院鞠大宏,等.非酒精性脂肪性肝病病证结合动物模型的研究进展1453其症状及临床特点,可把其归属于中医学的“胁痛”、“痞满”、“痰痞”、“瘀血”、“积聚”、“黄疸”等病的范畴.最早记载见于《难经》:“肝之积,名曰肥气”,故也称之肥气病,是指体内肥脂之气过多地蓄积于肝脏.《素问•痹论》:“饮食自倍,肠胃乃伤”和吴鞠通“肝气之郁,痰瘀阻络”,揭示该病与情志、饮食、痰湿及瘀血有关.现代众多医家亦认为,饮食不节、起居无常、情志失调、久病体虚,引起肝失疏泄,脾失健运,肾精亏损等导致肝、脾、肾三脏功能失调,湿热痰瘀互结于肝而致,其病位主要在肝,与胆、脾、肾关系密切.胡义扬教授[5]认为,NAFLD病机与痰、湿、瘀、积等有关,与肝、脾、肾三脏功能关系密切.关幼波[6]认为脂肪肝是由于肝炎治疗不彻底,湿热未清,湿伤脾阳,运化失司,聚湿生痰,热伤阴血,灼津生痰.由于湿热互结,阻滞血脉,血液行涩,而痰瘀交阻,终成痞块.加之饮食不节,膏粱厚味,嗜酒成性,进一步促进了病情的发展,其病位在肝脾,主要病理变化为湿热凝痰,痰瘀阻脉.李军祥教授[7]认为,NAFLD应重视肾虚血瘀对疾病发生发展的影响.黄静娟等[8]认为NAFLD的病因为饮食不节,过食肥甘厚味,恣意饮酒,情志刺激.肝脾肾三脏功能失调是本病病机的关键,痰湿、瘀血是本病的主要病理基础.目前NAFLD临床上尚未有统一的中医证型、分型标准以及治法方药.临床常见的辨证分型有肝气郁滞、气滞血瘀、湿热内蕴、痰瘀互阻、痰湿内阻、肝郁脾虚、肝肾阴虚、肝阴不足、阳虚浊阻、脾气虚弱,肾气阴两虚等[9-11].叶放等[12]总结了2003年以前15年来国内主要中医刊物有关脂肪肝的报道223篇,对其中出现的证型和用药频率进行统计,在547个证型频次中,出现频率依次为痰湿内阻(139)、瘀血(121)、肝气郁滞(121)、脾气虚弱(72)、肾气阴两虚(45)、湿热内蕴(35)、其他(14).本文据此选择了最常见的血瘀型、肝气郁滞型、脾气虚弱型、肾虚型四种,对NAFLD病证结合动物模型制作方法进行探讨.2NAFLD动物模型的选择NAFLD是病理组织学改变与酒精肝相似,但无过量饮酒史的一种慢性疾病[13].具有脂肪变性、肝细胞损伤及炎症细胞浸润等病理组织损伤,包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎和肝硬化3个阶段[14].随着人类生活水平的提高和饮食结构的变化,NAFLD的发病也呈现上升趋势.人们对该病的研究也越来越深入,但是对其发病机制尚不清楚.动物模型是研究人类疾病的重要手段,目前NAFLD的动物模型,国内外已有很多报道[15-17].NAFLD动物模型主要可以分为两大类:一类是由相关基因变异引起的遗传性模型(遗传性瘦素缺乏型小鼠模型、遗传性外周循环游离脂肪酸增加的小鼠模型、遗传性肝脏脂肪生成增加的小鼠模型及遗传性脂肪酸β2氧化减少的小鼠模型);一类是由饮食或药物引起的获得性模型(获得性游离脂肪酸和肝脏脂肪生成增加的小鼠模型,获得性脂肪酸β2氧化减少小鼠模型).在众多复制NAFLD模型的方法中,高脂饮食诱导的NAFLD模型最为常见.在高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病模型中,一种以高脂饲料(含87.7%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇+0.3%胆酸钠)喂养8-12wk后可形成中至重度大泡性肝脂肪变,伴转氨酶增高,100%复制出非酒精性脂肪性肝病模型[18];另一种是高脂配方的乳剂灌胃的造模方法,采用高脂液体饲料喂养SD大鼠(脂肪71%,碳水化合物11%,蛋白质18%),3wk即可形成全小叶肝细胞脂肪变,伴有肿瘤坏死因子2α和Ⅰ型胶原mRNA的表达增强和YP2E1mRNA表达下调,可诱发线粒体损伤和氧化应激[19].还有文献报导用花生油代替猪油制成高脂乳剂(花生油40g、胆固醇15g、奶粉8g、蔗糖15g等),SD大鼠连续灌胃,5wk内成功复制出大鼠非酒精性脂肪性肝病模型,并且发现富含多不饱和脂肪酸的花生油可比猪油获得更为理想的造模效果[20],但有文献报道采用高脂乳剂灌胃,实验动物常出现精神萎靡、皮毛无光蓬乱、腹泻、拒食、体质量下降甚至死亡的现象[21,22].因此我们推荐选择高脂饮食诱导的NAFLD模型.3NAFLD病证结合动物模型制作方法探讨3.1血瘀型NAFLD血瘀型动物模型是中医实验研究中常用的证型,关于该证型的制作方法较多,大鼠皮下注射大剂量肾上腺素加冰水应激是最早制作的方法,可复制出血液流变性呈黏、浓、凝、聚的血瘀证模型[23,24].该模型全血黏度,血浆黏度、全血还原黏度、血细胞比容、红细胞聚集指数、红细胞变形指数等血液流变学指标均有明显改变,但这种造模方法由于动物的耐受差,状态较差的大鼠易致死亡.因此又相继出现了半高脂饲料复合声、光、电刺激血瘀模型,■研发前沿中医药治疗非酒精性脂肪性肝病的机制研究已开展很多,但是一直没有一种能够符合中医证候理念的该疾动物模型的出现,这样的实验研究或将在某种程度上,影响了中医药治疗该病的疗效及治病机制的深入研究,因此病证结合动物模型是中医药治疗该病及所有疾病疗效及机制研究的关键点.■相关报道大量研究表明中医药治疗脂肪肝的优势在于中医的精髓-辨证论治,但是目前,关于该问题的研究存在着诸多问题,例如临床上尚需规范、系统的研究,而科研中缺乏对中医证候、病因病机的系统研究等.这些问题的解决,将对中医药治疗脂肪肝的研究提高到一个新的水平.世界华人消化杂志2010年5月18日第18卷第14期饥饿、疲劳等综合因素制作的气虚血瘀模型等多种的血瘀证方法[25-27