硕士论文-双探针实时PCR快速检测结核杆菌利福平耐药基因突变

山东省医学科学院硕士学位论文双探针实时PCR快速检测结核杆菌利福平耐药基因突变的研究姓名：张春雷申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：毛海婷20071001双探针实时PCR快速检测结核杆菌利福平耐药基因突变的研究作者：张春雷学位授予单位：山东省医学科学院相似文献(10条)1.期刊论文石瑞如.高飞絮.王江东.刘新.张国龙.ShiRuiru.CaoFeixu.WangJiangdong.LiuXin.ZhangGuolong利福平脂质体治疗小鼠结核病的初步研究-医学研究杂志2008,37(5)目的探讨利福平脂质体在治疗小鼠结核病中的效果.方法昆明小鼠60只,感染结核分枝杆菌标准株H37Rv制备结核模型.利福平用薄膜分散法制备脂质体.小鼠随机分为4组,利福乎组[10mg/(kg/d)]和利福平脂质体组[7mg/(kg/d)],口服绐药治疗1个月时,牺牲小鼠,观察肺的重量变化,取肺,脾,肝组织进行研磨制匀浆并进行菌落计数.结果利福平组和利福平脂质体组各自分别与正常对照组,空白脂质体组比较发现肺的重量具有显著改变(P0.01),而两组药物组之间无显著差异(P0.05).在肺、脾和肝组织的载菌量(cfu)比较时也显示出同样的情况.结论脂质体制剂可以减少利福平的剂量以减轻不良反应,在结核病的治疗中可能有很好的前景.2.会议论文糜祖煌.秦玲.李崇高rpoB基因套式PCR与测序在菌阴结核病及利福平耐药诊断中的应用本文应用以MtbrpoB基因为靶基因的套式PCR对109例菌阴结核病病人的痰标本进行检测,并对阳性产物进行DNA测序。研究结论:本研究提示以MtbrpoB基因为靶基因的套式PCR与DNA测序技术现阶段可作为BACTEC培养诊断结核病和利福平耐药的补充。3.期刊论文康万里.谢艳光.谭卫国.初乃惠.李亮.游永红.杨应周.王晓萌.闫兴录.缪梓萍.端木宏谨.KANGWan-li.XIEYan-guang.TANWei-guo.CHUNai-hui.LILiang.YOUYong-hong.YANGYing-zhou.WANGXiao-meng.YANXing-lu.MIAOZi-ping.DUANMUHong-jin含氟喹诺酮类药物方案治疗耐利福平肺结核患者的近期效果和安全性评价-中华流行病学杂志2009,30(2)目的评价中国结核病控制项目地区以含氟喹诺酮类药物方案治疗耐利福平肺结核患者的近期治疗效果和安全性.方法对2004-2006年黑龙江、浙江、深圳三省(市)结核病控制项目地区结核病耐药监测中发现的耐利福平肺结核患者随机分为试验组(含氟喹诺酮类药物方案组,采用3RFTAMOfxPtoPAS-INH/5RFTOfxPtoPAS-INH方案治疗)和对照组(复治方案组,采用3H3R3Z3E3S3/5H3R3E3方案治疗),采用遵循研究方案分析和意向性分析,比较两组的近期治疗效果并观察不良反应.结果(1)共入选154例耐利福平肺结核患者.其中单耐利福平25例(16.2%),耐多药(耐利福平+异烟肼、耐利福平+异烟肼+链霉素、耐利福平+异烟肼+乙胺丁醇和耐利福平+异烟肼+乙胺丁醇+链霉素)114例(74.O%),其他(耐利福平+链霉素、耐利福平+乙胺丁醇和耐利福平+乙胺丁醇+链霉素)15例(9.8%).114例耐利福平肺结核患者完成疗程,其中试验组71例,对照组43例.(2)经遵循研究方案分析试验组和对照组阴转率分别为78.9%和65.1%(X2=4.558,P=0.011);意向性分析试验组和对照组阴转率分别为65.9%和40.6%(X2CMH=0.272,P=0.001),试验组阴转率高于对照组;治疗耐多药的效果试验组阴转率高于对照组.(3)两组各有3例因严重不良反应退组;完成疗程的试验组不良反应发生率为23.9%(17/71),对照组不良反应发生率为18.6%(8/43),两组不良反应发生率差异无统计学意义(X2=0.446,P=0.504).结论含氟喹诺酮类药物治疗方案和复治方案治疗耐利福平/耐多药肺结核都可取得一定疗效,而且含氟喹诺酮类药物治疗方案组的疗效优于复治方案组.4.会议论文钟敏.胡忠义依赖利福平结核分支杆菌的研究概况(摘要)2002结核病是严重危害人类健康的公共卫生问题.耐药结核菌、特别是耐多结核菌的不断产生和传播是结核病疫情难以控制的关键.依赖利福平结核分枝杆菌(简称依R菌)的发现,给结核病的控制提出新的问题.本文就近年来依R菌的研究概况进行了介绍.5.期刊论文贾卫.阿依努尔.莫合买提.于静100例肺结核病患者尿中利福平测定-地方病通报2003,18(2)新疆被列为全国结核病控制项目省(区)之一,根据卫生部世界银行贷款项目办公室的要求,2000年初我们对100例肺结核病人服用利福平(RFP)后的尿液讲行了检测,现报告如下.6.期刊论文班俊敏.方龙超知柏地黄丸治疗利福平、异烟肼导致肝功能损害37例-安徽中医临床杂志2002,14(2)利福平、异烟肼是治疗结核病的临床必用药，但其有众多不良反应，特别是肝功能损害及持续低热。笔者1997年10月—2001年7月应用知柏地黄丸治疗因服用利福平、异烟肼等抗痨药导致的肝功能损害及持续低热37例，取得一定疗效。……7.期刊论文戈朝晖.王自立.魏敏吉.张明脊柱结核病椎骨中利福平浓度HPLC测定方法研究-脊柱外科杂志2005,3(3)目的建立利福平在脊柱结核髂骨与病椎骨中药物浓度的反相高效液相色谱分析方法.方法以利福喷丁为内标,采用氯仿为萃取剂处理骨匀浆样品,加入二乙胺解除利福平对骨基质的吸附.分析柱为HypersilBDSC18柱(150mm×4.6mm),以0.2mol·L-1KH2PO4(pH=4.0)-乙腈(65:35)为流动相,流速1.0ml·min-1,检测波长254nm,内标法定量.结果在0.0560～1.875μg·g-1骨匀浆浓度(相当于骨中浓度0.5600～18.75μg·g-1)范围内利福平和内标峰面积比与骨样本利福平浓度呈良好线性关系(r=0.9994),萃取回收率在88.47%～96.51%(n=5),方法回收率为98.85%～103.51%(n=5),日内、日间RSD分别为2.34%～4.58%,3.38%～5.79%,(n=5).结论本方法准确、精密度高、重复性好,是一可靠的测定骨中利福平浓度的方法,适用于脊柱结核手术患者体内正常及病椎骨组织中利福平浓度的定量分析,以便于个体化抗结核化疗方案的判定与改进.8.学位论文吴园Rv0341蛋白在结核分枝杆菌中的表达及其诊断依赖利福平结核分枝杆菌感染结核病的临床价值研究2009背景:依赖利福平结核分枝杆菌简称依R菌(Rifampin-dependentMycobacteriumtuberculosis)是指某些结核分枝杆菌依赖利福平(Rifampin，RFP/R)生长的现象，是比耐药性变异更为严重的生物现象。依R菌感染的结核患者具有病情重、耐多药、化疗效果差和预后不良的临床特征，如果此类患者继续使用利福平，可导致病情加重，是化疗失败和难治性结核病产生的重要原因之一，因此依R菌结核病的早期诊断对临床治疗及预后有重大意义。目的:本研究对依R菌中高表达的Rv0341蛋白进行分析，对其编码基因iniB进行限制性内切酶片段多态性分析(RestrictionFragmentLengthPolymorphisma，RFLP)。利用基因工程技术克隆表达Rv0341，纯化后鉴定重组蛋白的免疫原性和抗原性。建立以重组蛋白Rv0341为靶抗原检测血清Rv0341抗体的斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)，探讨其在依R菌结核病诊断中的临床价值，为进一步研究开发依R菌结核病诊断试剂盒提供理论依据和实验数据。方法:1.通过SDS-PAGE、免疫印迹分析Rv0341在结核杆菌R依赖株、耐受株和敏感株中表达的差异，RFLP鉴定Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性。2.自结核分枝杆菌H37Rv扩增iniB基因，通过基因重组技术构建于pET22b(+)表达载体，酶切、测序鉴定正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达，Ni2+亲和层析纯化目的蛋白。鉴定其免疫原性和抗原性：以重组Rv0341蛋白免疫家兔，检测产生Rv0341抗体的效价；典型依R菌肺结核患者(阳性)血清、健康人(阴性)血清分别与重组蛋白进行Western-blot。3.以重组蛋白Rv0341为靶抗原建立检测血清Rv0341抗体诊断依R菌结核病的DIGFA法。4.以上述建立的方法对患者(依R菌、R敏感菌、R耐药菌感染的结核病患者)结果:1.SDS-PAGE、免疫印迹证实Rv0341在依R菌中高表达，表达量与R敏感菌和耐R菌有明显差异。RFLP证实其编码基因iniB在不同类型的结核杆菌(R敏感菌、耐R菌、依R菌)中不具有多态性，是保守基因。2.成功构建了表达重组蛋白Rv0341的工程菌，经超声破菌、SDS-PAGE、UVP扫描证实重组蛋白表达量约占总蛋白的25％，主要以包涵体形式表达。用N12+亲和层析柱对目的蛋白纯化，获得纯度为95％的重组蛋白。纯化重组蛋白免疫家兔产生了效价≥1：100000的抗Rv0341抗体，与典型依R菌肺结核患者阳性血清发生反应，表明重组蛋白具有良好的免疫原性及抗原性。3.建立了以重组蛋白Rv0341为靶抗原的诊断依R菌结核病DIGFA法，该方法具有良好的重复性和稳定性。检测95份结核病患者血清，其诊断依R菌结核病的灵敏度为95.8％，特异性为81.7％，准确度为85.3％。结论:1.RFLP结果证实iniB为保守基因，不同菌株Rv0341蛋白表达方面的差异不是基因突变所致，可能是在利福平诱导下引起转录水平变化所致。2.利用基因工程技术高效表达了重组蛋白Rv0341，并获得纯度较高的重组蛋白。3.建立了以重组Rv0341为靶抗原诊断依R菌结核病的DIGFA法，在初步应用中显示了较高的灵敏度和特异度，为研发诊断依R菌结核病DIGFA试剂盒奠定了理论和实验基础。9.期刊论文糜祖煌.秦玲.韦昌谦结核分支杆菌rpoB基因套式PCR在利福平耐药和结核病辅助诊断中的应用-现代实用医学2003,15(5)目的分析耐利福平的结核分支杆菌(Mtb)rpoB基因突变状况.方法对38株耐利福平Mtb菌株的rpoB基因突变高频区域进行套式PCR扩增,并进一步全自动测序.结果38株耐利福平Mtb中有36株存在突变(包含5个密码子11种形式的突变),突变率94.7%.结论MtbrpoB基因的突变与利福平耐药高度关联,rpoB基因套式PCR及测序能快速、正确鉴别耐利福平菌株.10.期刊论文陈文忠.金志兴.徐萍.袁炳荣.CHENWen-zhong.JINZhi-xing.XUPing.YUANBing-rong利福平与利福喷丁对氯氮平血浓度的影响-临床精神医学杂志2006,16(5)目的:比较利福平与利福喷丁对氯氮平血药浓度和去甲基氯氮平血药浓度及疗效的影响.方法:随机将50例伴肺结核的精神分裂症患者平分为利福平组和利福喷丁组,每组25例,分别于合用前及合用2、6周末采用高效液相色谱法(HPLC)测定氯氮平和去甲基氯氮平血药浓度,同期以阳性与阴性症状量表(PANSS)评定精神症状.结果:两组患者合用2、6周末去甲基氯氮平和氯氮平血浓度与合用前比较差异均有非常显著性.利福平组精神症状恶化者明显较多,出现精神症状恶化时间明显较短.结论:利福喷丁较适用于精神分裂症伴肺结核患者的抗痨治疗.本文链接：授权使用：上海海事大学(wflshyxy)，授权号：18a8b186-948a-4dd8-87f0-9dff01180b5e下载时间：2010年9月28日