NHS磁珠使用原理及详细的操作步骤应用范畴

专注于“磁纳米，微萃取”NHS磁珠产品介绍-----英芮诚生化科技目录CONTENTS产品介绍产品特点应用实例背景知识背景知识免疫磁珠，也称免疫磁性微球，是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子，基本上由载体微球和免疫配基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心外层包裹聚合物，最外层是免疫配基。免疫磁珠技术：是一种以特异的抗原抗体反应为基础的免疫学检测和分离技术。它是以抗体包被的磁珠为载体，通过抗体与反应介质中特异性抗原结合，形成抗原—抗体复合物，此复合物在外加磁场的作用下发生定向移动，从而达到分离抗原的目的。产品介绍NHS磁珠|ProtElutNHS【偶联容量】：200-300ug生物分子/ml磁珠悬浮液【性状】：棕黑色均匀悬浊液；【保存】：2℃~8℃保存，请勿冻融使用。分散剂：DMF。【规格】：100-120nm，单分散；1mL；【用途】：适用于含伯胺（或者伯胺标记）的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子。通过独特的高分子聚合技术，在超顺磁性Fe3O4纳米核外形成结构致密、性能稳定的核-壳聚合体，在单分散的磁珠表层键合高密度的功能基团，形成界限清晰核壳结构的NHS磁珠。与传统的羧基、氨基磁珠相比，采用ProtElutNHS无需事先采用EDC或戊二醛活化，在偶联缓冲液中室温混合30min，ProtElutNHS即可与带有伯氨基的生物配体直接偶联，形成稳定的C-N共价键，实现生物配体与ProtElutNHS的共价偶联。操作流程磁珠准备目标生物分子的偶联封闭未反应的活性基团偶联后磁珠保存IP实验（可选择）1.磁珠的准备（以100uL为例）100ulNHS磁珠PBS清洗2次弃上清100ul偶联缓冲液2.目标生物分子的偶联500ul偶联缓冲液10-15ugIgG孵育1-2h弃上清可用于偶联率测定3.封闭未反应的活性基团混匀15-30min/4℃反应1h弃上清弃上清1mlPBS重复一次500ul封闭剂4.磁珠保存/后续实验1ml保存剂4℃保存偶联量高，每100ul磁珠约偶联20~30ug生物分子；1产品特点100ul20~30ug100ul5~10ug由于SDS-PAGE加样缓冲液中含有巯基乙醇从而导致抗体的重链与轻链之间的二硫键被破坏从而使得抗体分子变成重链分子(55KD)和轻链分子(25KD)。所以当目的蛋白的大小接近重链或者轻链分子时，重链或者轻链分子的WB信号常常由于信号过强而导致影响对目的蛋白的WB结果判断。与ProteinA/G相比，免疫反应后洗脱可获得无背景干扰的目标蛋白；（轻重链影响）25操作简单、条件温和，可直接与生物配体共价偶联，偶联生物配体后稳定；生物相容性好，非特异性吸附少；3快速分离，效率高，外加磁场10-20s实现磁珠分离。4应用范围NHS磁珠可与带有伯氨基的生物配体直接偶联，形成稳定的C-N共价键，实现生物配体与NHS磁珠的共价偶联。封闭剂抗体发光试剂盒应用实例英芮诚NHS磁珠与A公司磁珠偶联甲胎蛋白（AFP）测试对比（Bradford蛋白定量法测定）与A公司磁珠相比，英芮诚NHS磁珠的偶联量更高，偶联效率达85%。OD-1OD-2均值残留浓度残留量加入量偶联率A磁珠0.0971160.0976860.0974010.0339.9μg30μg66.70%英芮诚NHS0.0846500.0850440.0848470.0154.5μg30μg85.00%NHS磁珠偶联黄曲霉毒素单克隆抗体AFM1测试（Bradford蛋白定量法测定）(*)*：偶联体系：1mL，pH=8.0；磁珠使用量：100μL。随着AFM1浓度的增大，偶联上磁珠的抗体增多，抗体投量为30μg时，偶联效率达84.40%。AFM1单克隆抗体投量（μg）偶联量（μg）偶联效率（%）5.004.7192.4010.009.4694.6020.0019.5297.6030.0025.3284.40谢谢