2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体教学用

学习目标：1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同。2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义。3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用。回忆已学知识，你知道哪些动物细胞融合的实例？受精作用一、动物细胞融合回忆已学知识，你是否已经见到过动物细胞融合的实例？人鼠细胞融合实验一、动物细胞融合你是否已经学过诱导细胞融合的技术？植物体细胞杂交技术一、动物细胞融合阅读课本P52及识图2-23，并思考讨论以下问题一、动物细胞融合1、动物细胞融合的概念是什么？2、动物细胞融合的结果是什么？3、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？4、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？5、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？6、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？7、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？8、为什么要用灭活的病毒？9、动物细胞融合有什么意义？一、动物细胞融合1、动物融合的概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程。融合后形成的单核细胞称为杂交细胞。2、动物细胞融合的结果是什么？4、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？5、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。3、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞一、动物细胞融合6、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？不灭活的病毒能作为诱导剂吗？能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导不可以，因为病毒寄生在活细胞内。相同，都是细胞膜的流动性一、动物细胞融合7、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？8、为什么要用灭活的病毒？病毒一般对生物体是有伤害的。9、动物细胞融合的意义及作用是什么？意义：突破了有性杂交方法的局限，使远源杂交成为可能。作用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段.特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体仙台病毒物理或化学方法丧失感染活性保留融合活性一、动物细胞融合细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质原理？一、动物细胞融合10、过程：植物A细胞植物B细胞去壁原生质体A原生质体B诱导融合融合体再生壁杂种细胞组织培养细胞培养动物细胞融合与植物体细胞杂交有哪些不同？诱导融合的方法有哪些？筛选一、动物细胞融合植物体细胞杂交的比较主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）生物：灭活的病毒物理（离心、振动、电激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较化疗是治疗癌症的常用手段。但是化疗药物在杀死癌细胞的同时会破坏正常细胞产生巨大的副作用。如何能让药物只作用于癌细胞？如何在早期对癌症进行检测和筛查？什么物质可以特异性识别癌细胞并与之结合？抗体可以特异性识别癌细胞并与之结合目标：让药物只作用于癌细胞。找到能敏感识别癌细胞的物质。解决思路：什么是抗体？如何获得抗体呢？1.什么是抗体？2.由何种细胞产生？3.主要分布在哪里？4.起何作用？浆细胞（效应B细胞）血清特异性免疫作用抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的蛋白质。．克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。5.如何获得抗体呢？抗原吞噬细胞摄取处理T细胞暴露、呈递B细胞直接刺激浆细胞增殖、分化抗体产生从动物血清中分离淋巴因子获取抗体的传统方法该方法的缺点是？传统获得抗体方法的缺点：产量低，纯度低，特异性差如何获得大量的、特异性强的抗体？利用动物细胞培养技术克隆单一的经免疫的B细胞这就是“单克隆抗体”读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体：用单个B淋巴细胞进行无性增殖（扩增），也就是通过克隆，形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗体二、单克隆抗体单克隆抗体•AntibodiesAntigen单克隆抗体与多克隆抗体提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？问题：如何大量生产单克隆抗体？单克隆抗体的制备二、单克隆抗体一个效应B细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞骨髓瘤细胞能无限增殖+二、单克隆抗体•实验目的:制备单克隆抗体.•实验原理：•实验过程：1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验二、单克隆抗体一种效应B细胞只分泌一种特异性抗体单克隆抗体制备过程二、单克隆抗体诱导融合选择培养基筛选，继续培养克隆能产生抗体的阳性细胞体外培养否或小鼠腹腔内增殖动物细胞融合动物细胞培养单克隆抗体制备过程----流程图给小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴细胞（免疫）骨髓瘤细胞杂交细胞杂交细胞（B-瘤细胞）单克隆抗体杂交瘤细胞瘤-瘤细胞B-瘤细胞B-B细胞二、单克隆抗体单克隆抗体制备过程(1）什么是免疫的小鼠?怎样对小鼠进行免疫？(2)图中的B淋巴细胞有何功能？骨髓瘤细胞有何功能？杂交瘤细胞有何特点？(3)怎样才能将B细胞与骨髓瘤细胞融合？(4)为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？(5)融合后可能有几种类型的细胞?(6)两次筛选的目的是什么？(7)培养杂交瘤细胞的方式有哪两种？(8)制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？二、单克隆抗体三、单克隆抗体的应用1、诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头2、治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。