细胞治疗-钱宝华

上海长海医院输血科钱宝华细胞治疗的概念广义：指给机体输入或去除细胞制剂，以增强/减弱机体的免疫应答，恢复机体的正常功能与状态。例如使用各种细胞性血液成分、细胞疫苗、干细胞移植、过继免疫细胞治疗等狭义：是取患者自身或无关供体的免疫细胞在体外经特异性抗原和细胞因子刺激，活化、增殖后，再转输入患者体内，使其在患者体内发挥抗肿瘤作用细胞治疗种类细胞疫苗肿瘤细胞疫苗基因修饰瘤苗干细胞造血干细胞（骨髓、外周血、脐血）间充质干细胞其他干细胞免疫性细胞DC细胞特异性杀伤性T细胞LAK细胞和CIK细胞过继性细胞治疗是继手术、放疗、化疗之后的第四种模式，是最有效的免疫治疗手段之一美国食品和药品管理局（FDA）于2005年批准应用干细胞治疗心肌梗塞和创伤性脑损伤，使细胞治疗从科研走向了临床阶段理想的过继性细胞免疫治疗的活性细胞的必备条件是：对肿瘤细胞有特异性的选择性杀伤活性，对正常细胞无明显作用，不产生GVHD，无排斥，宿主能耐受，细胞来源丰富，能在体内增殖，无致热原，无致病原过继性免疫细胞治疗的优点免疫细胞通过在体外培养，绕过体内肿瘤免疫障碍，原来对肿瘤抗原已产生耐受的免疫细胞可以恢复其敏感性免疫细胞的活化及效应过程由细胞因子介导，体外活化扩增大量的抗肿瘤免疫细胞更有效免疫细胞的体外活化扩增可避免一些制剂体内大量应用带来的严重毒副作用在体外大量扩增自体或异基因的抗肿瘤免疫细胞，其数量大于肿瘤疫苗在体内激活的效应细胞数DC治疗性疫苗的近期临床研究抗原致敏DC的策略表位肽、肿瘤抗原蛋白、编码肿瘤抗原的DNA、mRNA、病毒载体、肿瘤细胞裂解物、凋亡小体树突状细胞＋细胞因子(IL-2,IFN-γ等)树突状细胞＋佐剂(CD40L,KLH,Flt-3等)树突状细胞＋淋巴细胞抗原致敏的DC治疗的输注途径静脉皮下皮内肿瘤局部淋巴结内淋巴内DC疫苗在前列腺癌治疗中的应用以DC治疗性疫苗研发著名的Dendroen公司，2005年已经完成了前列腺癌DC治疗性疫苗(前列腺磷酸酯酶与GM-CSF的融合蛋白致敏的DC,PROVENGE)的I-III期临床研究，获得了明显的疗效，已经向FDA提出上市申请在III期临床试验的第一阶段(D9901)，127例接受治疗的前列腺癌患者中位生存时间及3年生存率分别为25.9个月和34%，高于安慰剂组的21.4和11%，而在III期临床试验的第二阶段(D9902A)接受治疗的98例患者中，中位生存时间及3年生存率分别为19个月和32%，亦高于安慰剂组的15.4个月和21%，全部III期临床试验中接受治疗的患者中位生存时间及3年生存率分别为23.2个月和33%，显著高于安慰剂组的18.9个月和15%。DC疫苗在恶性黑色素瘤治疗中的应用Michael对Ⅳ期恶性黑色素瘤患者进行了Ⅰ/Ⅱ期的临床试验，采用经照射的自身肿瘤细胞刺激的DC经皮下输注于患者的方法。17例有足够的肿瘤组织刺激DC而接受治疗的病例，在分别接受0.9×106或5×106DC治疗后出现3例CR，平均维持时间为35个月，3例PR，维持时间分别为19.5、8、21个月，以及6例PD（其中一例在14个月后转为CR），患者对不同剂量的DC均有良好的耐受，未见明显的副作用。DC疫苗在肾癌治疗中的应用Holtl等2002年完成对35名转移性肾癌患者的DC临床试验。肿瘤抗原为自体或异体癌细胞系A-498溶解产物以及KLH。2/27名患者出现CR，1名PR，7名SD，17名PD。11/11出现对KLH的强免疫反应，5/6出现对瘤胎抗原(OFA/LRP未成熟的层粘蛋白受体)免疫反应的增强，到结果公布，平均随访时间32月，且有8名病人存活。非成熟DC瘤内注射在神经胶质瘤治疗中的应用Yamanaka等进行了自体肿瘤细胞裂解物致敏的DC治疗复发的神经胶质瘤的Ⅰ/Ⅱ期临床试验，致敏的DC经OK-432细胞刺激成熟或不经其刺激的非成熟的DC，采用经皮内注射或瘤内与皮内相结合的方法输入患者体内。在24名接受治疗的患者中，1/24PR，3/24MR，10/24SD，10/24PD，4期胶质瘤患者的总体生存时间为480天，明显高于对照组，采用两种输注方式结合的患者的有效率高于单一输注方式的患者，接受治疗的患者ELISPOT和DTH检测均标明体内产生了免疫反应。供者淋巴细胞输注(DLI)供者淋巴细胞可识别宿主细胞表面主要组织相容性抗原(MHC)、次要组织相容性抗原(MiHC)和肿瘤相关抗原，是天然有效的抗肿瘤工具DLI适用于恶性血液病BMT后早期复发的患者及allo-BMT后Epstein-BaIT病毒相关的淋巴细胞增殖性疾病、巨细胞病毒感染和腺病毒感染等DLI发挥GVL的效应细胞细胞毒T细胞：免疫表型为CD3+CD8+CD16-可有CD4+)；其完全激活需特异性抗原，抗原递呈细胞包括树突状细胞、协同刺激分子及辅助细胞等NK细胞：免疫表型为CD3-CD56+CD16+。可被多种细胞因子激活，尤其IL-2、IL-12NK样细胞：免疫表型为CD3+CD56+，可产生粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，干扰素(IFN)及肿瘤坏死因子(TNF)，但不产生IL-4，体内活化不需要外源性IL-21DLI治疗BMT后白血病复发的特点起效时间较慢：多出现于治疗后3～7周，达到分子水平缓解所需时问更长，约半年以上显效者常伴有轻度至中度的急性和/或慢性GVHDalto-BMT后DLI的GVHD较alLo-BMT后并发的GVHD轻，较易处理，与输人的异基因细胞数量不成比例DLI治疗效果有明显的疾病相关性，虽对各类白血病复发均能产生一定的逆转作用，但对CM1的疗效最佳IL-2等细胞因子可增强DLI的GVL效应细胞因子激活的杀伤细胞（CIK细胞）CIK细胞是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子[如抗CD3单抗(CD3McAb)、白介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ及IL-1α等]共同培养一段时间后获得的,具有非主要组织相容性抗原(MHC)限制性杀瘤活性的一群异质细胞CIK细胞主要用于自体骨髓移植物的净化、微小残留病灶的清除及晚期恶性肿瘤(包括急慢性血液系统恶性疾病和各种实体瘤)的免疫治疗CIK细胞抗肿瘤的特点CIK细胞增值速度快，且细胞活性也大大增强。CIK细胞在培养过程中加入多种细胞因子后，其细胞增值速度迅速加快，远远超过LAK细胞，经过2－3周左右的培养，其中CD3、CD56细胞不仅绝对数量增加50－1000倍，而且其在总细胞中所占百分比也大幅上升杀瘤活性高：其体内的杀瘤细胞毒性的维持不必依赖大剂量外源性IL-2的持续给予，其杀伤单位（TLU）为LAK细胞的73倍以上具有识别肿瘤的机制，对正常细胞无毒性作用。CIK细胞杀瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制剂的影响，其对正常骨髓造血前体细胞毒性很小CIK细胞抗肿瘤的特点杀瘤谱广，没有T淋巴细胞杀伤时的MHC限制性，对于多肿瘤细胞系和新鲜肿瘤组织均表现出较大的杀伤活性。可用于白血病、淋巴瘤、胃癌、肺癌、大肠癌等多种肿瘤的治疗对多重耐药肿瘤细胞同样敏感：研究发现CIK细胞对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas－FasL凋亡：研究表明过继性免疫治疗失败的一个重要原因是效应细胞被肿瘤细胞表面表达的某些蛋白诱导而凋亡，而CIK细胞虽然在Fas被占据后会引起少量细胞凋亡，但对其杀瘤细胞毒性没有明显影响，Verneris的研究表明CIK细胞具有合成FasL的能力CIK细胞与LAK细胞、TIL细胞的差别LAK细胞主要来源于CD3、CD56NK细胞，对靶细胞的杀伤性无MHC限制性，但由于LAK细胞体外扩增能力较低和体内杀瘤活性不高，故临床应用受到限制TIL细胞是从肿瘤组织中分离出来的具有杀伤肿瘤细胞特性的淋巴细胞，杀伤活性较LAK强，但是对肿瘤的杀伤作用有MHC限制性，其在分离过程中容易变异同时体外扩增较为困难，因此难以广泛应用于临床CIK细胞的杀伤活性明显较LAK细胞为高，具有非MHC限制性，其不似TIL细胞样需要与肿瘤细胞直接接触才能增殖。由于CIK细胞具有高增殖能力和高细胞毒力且对正常骨髓细胞抑制轻微，其更适用于肿瘤生物治疗项目CD3CD4CD8CD3+CD56+CD3-CD56+CIK99.825.870.936.90.21LAK83.227.156.91.630.56CIK细胞与LAK细胞、TIL细胞的差别CIK细胞的作用机制释放多种炎性细胞因子,如IFN-γ、TNF-α、穿孔素、颗粒酶B等杀伤肿瘤细胞,亦可通过Fas途径诱导肿瘤细胞凋亡CIK细胞中的CD4+T细胞通过释放多种免疫活性细胞因子上调机体免疫力,并诱导肿瘤细胞凋亡来发挥其抗肿瘤效应。CIK细胞与树突状细胞(DC)共同孵育后,可有效降低其中抑制性CD4+CD25+调节T细胞比例,从而显著增强CIK细胞对多种肿瘤细胞的杀伤活性童春容等对111例急性白血病患者行自体CIK或DC-CIK治疗,96例达完全缓解(CR),7年无病生存率(DFS)为66%SchmidtWolf等利用人IL-2cDNA转染的CIK细胞治疗了10例转移性实体瘤患者,1例CR,3例病情稳定病种例数CRPRMRSDPDCR+PR%胃癌14543832185342（30.0）肝癌8822229211724（27.3）肺癌68131189932（47.0）胰腺癌501141571315（30.0）卵巢癌27112102213（60.0）总计378912811565103140（37.0）CIK细胞治疗肿瘤临床疗效CIK细胞过继免疫治疗的副反应CIK细胞输注后4～6h内9例患者(20.9)出现发热反应，体温37．5～38．5C，发热2h后自动退热；1例患者出现恶心，胸闷症状，对症处理后缓解观察全身反应中，回输后引起了流感样等副作用症状，其中寒战13例，发热9例，恶心呕吐1例，全身不适3例体内数量少，分离纯化有一定困难必须配合系统的内科治疗出凝血机制障碍、严重感染病人需谨慎操作容易引起过敏反应和GVHD可能增加的感染机会操作本身异体过继免疫细胞细胞过继免疫治疗存在的问题钱宝华主任医师、教授、博士研究生导师上海长海医院输血科主任中国人民解放军上海血站主任中国人民解放军血液监督中心主任上海市临床输血质量控制中心主任