自然杀伤细胞课件

NK细胞的研究历史NK细胞的发育分化NK细胞受体的分类NK细胞受体识别的配体NK细胞其它膜分子及其识别的配体NK细胞的生物学活性NK细胞的亚群NK细胞与临床70年代初抗肿瘤研究中发现，无需Ab存在和预先致敏条件下即可杀伤肿瘤细胞的淋巴细胞大颗粒淋巴细胞（LGL）参与固有免疫（innateimmunity）如何区别“自身”和“非己”？?早期研究NK细胞的研究历史90年代初提出“失去自己（missingself）”假设发现NK细胞受体（种类繁多，活化型或抑制型）鉴定出一批NK细胞受体识别的配体NK细胞表面标志（CD分子和黏附分子等）信号转导、功能及临床研究的深入90年代有重要突破发育分化场所：主要在骨髓和胸腺重要细胞因子：SCF、flt3L、IL-7、IL-15（分化）IL-12、IL-18、IL-2（刺激）分布：脾（3~4%）、PBMC（6~15%）、BM淋巴细胞（1%）、肝脏、肺脏NK细胞获得免疫耐受抑制性受体的表达假说：“至少有一种抑制性受体的模型”NK细胞的发育和分化根据NatureReviewsImmunol,2007;7:703修改胸腺ELPNKPiNKmNK骨髓HSCNKPiNKmNKNKPiNKmNK外周淋巴器官肝脏NKPiNKmNKNK细胞的发育途径ELP：早期淋巴样前体细胞；NKP：NK细胞前体iNK：非成熟NK细胞；mNK：成熟NK细胞LinCD122+CD34+/CD34IL15R+CD122CD161CD117（KIT）细胞因子在NK细胞分化中的作用NK祖细胞CD122+CD16+/CD16CD56+CD161+IL12、IL18IL15flt3LSCF,IL7IL15IL15NK前体细胞成熟NK细胞(I)成熟NK细胞(II)IL2按其配体是否为MHCI类分子识别MHCI类(Ia或Ib)分子的受体识别非MHCI类分子的受体按受体胞膜外区结构：IgSF和CL-SF按其基因定位分为不同家族KIR、ILT/LIR、CD94/NKG2、Ly49和NKR-P1家族以及NCR家族按功能：抑制型受体和活化型受体NK细胞受体的分类KIR家族(killerimmunoglubulin-likereceptor)IgSFILT/LIR家族(immunoglubulin-liketranscript/leukocyteimmunoglubulin-likereceptor)IgSFCD94/NKG2家族CL-SFLy49家族CL-SFNKR-P1家族CL-SFNCR家族(naturalcytotoxicityreceptor)IgSF按受体基因定位分为不同家族NK基因复合体NKRP1CD69CD94NKG2Ly49小鼠6号染色体NKRP1ACD69CD94NKG2Ly49L人12号染色体1a1c1d1fdecadfeca(n=1~14)(n=1~10)(n=1~7)(n=1~7)(n=1~10)HumanChr.19qCD66NKG7ILTsLAIRsILTsKIRsMouseChr.7CD66NKG7PIRs白细胞受体复合体(LRC)的组成LRC:leukocytereceptorcomplexKIR分子的结构D2D2D1D0ITIMsITAM2DL2DS2DL43DL3DSSSD1D2D1D2D0SSKKSSSSSSSSSSSSSSD2D1D0SSSSSS亚家族及成员其它命名反应mAb胞膜外区Ig样区跨膜区带电荷氨基酸胞浆区结合HLA特异性传递信号性质氨基酸数ITIM数KIR2DKIR2DL(L1-L4)KIR2DL1p58.1,CD158aEB6HP3E4D1+D2842HLAC1组抑制性KIR2DL2/L3p58.2,CD158b1/b2GL183DX27,CHLD1+D2842HLAC2组抑制性KIR2DL4CD158dD0+D21141HLAG等抑制性KIR2D5CD158fKIR2DS(S1-S6)KIR2DS1p50.1,CD158hEB6HP3E4D1+D2赖氨酸,结合DAP12390HLAC1组活化性KIR2DS2p50.2,CD158jGL183DX27,CHLD1+D2赖氨酸,结合DAP12390HLAC2组活化性KIR2DS3D1+D2赖氨酸,结合DAP12390HLAC组活化性KIR2DS4CD158iKIR2DS5CD158gKIR2DS6CD158cKIR家族的成员和结构KIR家族的成员和结构亚家族及成员其它命名反应mAb胞膜外区Ig样区跨膜区带电荷氨基酸胞浆区结合HLA特异性传递信号性质氨基酸数ITIM数KIR3DKIR3DL(L1,L2,L7)KIR3DL1P70CD158e1DX9Z27D0+D1+D2842HLABw4抑制性KIR3DL2p140CD158kNKAT45.133Q66D0+D1+D2(二聚体)952HLAA3,A11抑制性?KIR3DL7CD158z抑制性KIR3DS1p70CD158e2D0+D1+D2赖氨酸,结合DAP12270C2ssILT2ILT5ILT3ILT1ILT7ILT8LIR6aILT11ILT6R+DDFcRSSITIMITAMC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssLIR8ILT4ILT/LIR家族的组成和分子结构抑制型受体活化型受体可溶型受体C2ssC2ss-SS-SSVssSS-Vss-SSDAP-2SSNKp46NKp30NKp44(CD335)(CD337)(CD336)ITAMNCR的分子结构及其膜相关分子CD94/NKG2的分子结构SSITIMITAMDAP12ITAMDAP10/DAP12抑制性受体活化性受体活化性受体SSSSCD94NKG2A(CD159a)CD94NKG2C(CD159c)NKG2D(CD314)(同源二聚体)Ly49分子的结构Ly-49A,B,C,E,F,G,ILy-49D,HITIMITAMDAP12抑制性受体活化性受体SSSSNKR-P1分子结构NKR-P1BNKR-P1C(NK1.1/CD161c)ITIMITAM-SSSSNK1.1/CD161c单抗在研究中的应用是小鼠NK细胞的标志体内注射NK1.1mAb是清除小鼠体内NK细胞的方法NK1.1+CD3+为小鼠NKT细胞标志NKNKP815P815促进杀伤抑制杀伤活化型受体抑制型受体重导向杀伤试验确定NK活化型/抑制型受体受体家族识别配体KIR家族HLAIa(A,B,C);HLAIb(G)LIR家族HLAI,HLA-GNCR家族HA,B7-H6,BTA-3CD49/NKG2家族HLA-ENKG2DULBP,MICA/BLy49家族H-2I类分子NKR-P1家族LLT1,CIr-BNK细胞受体识别的配体非经典的MHCⅠ类分子HLA-E、HLA-F、HLA-GKIR识别经典MHCI类分子的特异性KIR2DL1KIR2DL2KIR3DL1KIR3DL2NKAT4KIR2DL4HLAC(第一组)HLAC(第二组）：ITIM：自身或外来肽段HLABw4(7783aa)HLAA3、A11HLAG和其他NK细胞APC/靶细胞：经典的HLAI类分子或HLAG分子ssssLy49家族识别H-2I类分子H-2Ⅰ类分子Ly49NKp46血凝素(HA)(如流感病毒)NKp44HA(如流感病毒),BCGNKp30BAT3(HLA-Bassociatedtranscript3)B7-H6HLA-B相关转录物3(BAT3)由肿瘤细胞所释放,B7-H6表达于肿瘤细胞NCR的配体配体为凝集素分子小鼠抑制性受体NKR-P1B配体C型凝集素相关b(Ctypelectin-relatedb,Clr-B)，同源二聚体，编码基因定位于NK基因复合体，肿瘤细胞表达Clr-B水平与对杀伤敏感性相关人抑制性受体NKR-P1A配体凝集素样转录物1(lectin-liketranscript1,LLT1)，与人NKR-P1A结合后抑制NK细胞的细胞毒和IFN-分泌。胶质瘤细胞高表达LLT1，与肿瘤免疫逃逸有关配体为非经典MHCI类分子(MHCⅠb)HLA-E结构：同经典HLA-I类分子相似，如与2m组成复合体，结合9肽（主要来自HLA-I类和HLA-G重链先导序列3-11位aa）相应受体：CD94/NKG2调节NK活性：CD94/NKG2A抑制性（为主）CD94/NKG2C刺激性胎盘滋养层表达HLA-E，抑制母体蜕膜中CD94/NKG2A+NK的杀伤作用，维持胎盘免疫耐受;肿瘤细胞丢失HLA-I类分子和上调HLA-E分子，分别逃逸CTL和NK两种细胞的杀伤配体为非经典MHCI类分子(MHCⅠb)HLA-G结构：同经典HLA-I类分子相似，结合9肽相应配体：ILT2、ILT4、KIR2DL4表达：高表达于胎盘外绒毛细胞滋养层作用：抵抗NK细胞杀伤，维持胎盘免疫特免作用；黑素瘤可高表达HLA-G，抑制NK杀伤与具有ITAM膜相关分子相连的NK细胞受体膜相关分子ITAM基序数相连的NK细胞受体3/3CD16、NKp46、NKp303/1CD16、NKp461/1CD16、ILT1、ILT1样蛋白、ILT7ILT8、LIR6a、NKRP1C(CD161c)DAP12(同源二聚体)1/1KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3KIR3DS、NKp44、CD94/NKG2C、ELy49D、Ly49HDAP10(同源二聚体)1/1NKG2D具有ITAM模体NK活化型受体示意图MHC/肽，IgG，Ag免疫受体ITAMPLCγ活化，磷酸化配体结合相应受体MHCI/肽免疫受体——[DAG→IP3→激活Src家族PTK募集和活化含SH2-信号分子活化转录因子免疫活化FynLckLynZAP70PIP2PKCCa2+ITIMSHP-1(SHP-2)使CD3ζ、ZAPPLCγ去磷酸化免疫抑制磷酸化或去磷酸化ITAM、ITIM免疫受体与信号转导网络关系NK细胞其它膜分子及其参与NK细胞的功能种类和成员参与NK功能CD16(FcRIIIA)活化NK,ADCCCD160(BY55)协同受体CD2(LFA2)活化性受体,黏附内皮细胞,穿越血管,局部浸润CD226(PTA1/DNAM1)活化性受体CD96活化NK表达水平明显增加PECAM1(CD31)黏附内皮细胞CD56不清CD223(LAG3)活化NK细胞CD244(2B4)MHC非限制性杀伤,活化性受体LAIR1(9.1C3)抑制性受体NK细胞其它膜分子及其参与NK细胞的功能种类和成员参与NK功能整合素家族VLA16(1)促进NK杀伤功能,黏附内皮细胞,穿越血管,局部浸润LFA-1(CD11a/CD18,2)黏附内皮细胞,迁移到淋巴结和组织4/7沿血管滚动选凝素CD62L穿越内皮细胞到组织C型凝集素样超家族CD69活化NK细胞碳水化合物CD57CD15s沿血管滚动CD162R(PEN5)结合Lselectin,黏附和迁移Link结构CD44穿越血管和局部浸润LAIR-1andLAIR-2结构示意图PredictedO-linkedglycosylationsitevSSvSSLAIR-1(CD305)LAIR-2(CD306)参与NK细胞识别靶细胞的黏附分子NK细胞膜分子靶细胞上相应配体IgSFCD2LFA3CD16结合靶细胞上的IgGPTA1CD155,CD112CD96CD155CD160(BY55)HLA-C整合素LFA1ICAM1,2Mac1,p150,95ICAM1,2CD44HA,FN,MAdCAM1NK细胞参与黏附、穿越内皮细胞的膜分子作用时相NK细胞膜分子配体滚动Lselectin(CD62L)s