常州工程职院仪器分析测试技术课件5-3高效液相色谱法：归一化法测定分析纯甲苯的纯度

任务3归一化法定量î液相色谱分析法模块之p完成分析纯甲苯试剂纯度的测定p能进行定性定量分析î能力目标p有没有更简单的方法可以用来测量溶剂或试剂的纯度呢？p甲苯常作为化工中间体原料试剂，按物料入库要求，需要抽样检查，如何测定甲苯试剂的纯度？î课程引入Ø液相色谱法,Ø灼烧残渣法Ø沸程测定法Ø气相色谱法î测定过程演示1p配制流动相Ø把二次蒸馏水和色谱纯级甲醇以15：85的比例混合Ø取混合均匀的溶液，经0.45µm的有机膜过滤，再脱气15分钟即可î测定过程演示2p把流动相贮液器放置在略高于高压泵的位置，插入带有不锈钢滤头的输液管p开启高压泵电源开关，打开排放阀p设置流动相比例、流量等参数,揿下高压泵启动鍵“ON/OFF”，再按“Purge”鍵，仪器开始清洗高压泵和排除管路中的气泡。p观察废液出口，若没有气泡，按“Purge”鍵，停止排放，关闭排放阀。p打开检测器电源开关，设置检测波长。p待仪器运行平衡后，用液相进样针进样，一般为定量管的3~5倍的体积。p操作工作站,对所注射样品的谱图进行分析，并记录峰面积及保留值。î测定过程问题、讨论与总结1p甲苯的定性问题：一般可采用标准物质进行保留时间的对照来定性。p色谱分离条件的设置(回忆上一课时测定苯的色谱分离条件）mobilephase:水：甲醇=15：85Column:C18ODS4.6mm×150mmFlow:1.0ml/minλ:254nmTemp:25℃î测定过程问题、讨论与总结2p分析纯甲苯纯度的定量问题：本项目的测定采用“归一化法”进行定量。项目分析纯甲苯纯度的测定定量方法归一化法要求1、样品中各组分均出峰，完全分离，且均有响应；2、进样量无须准确。计算公式方法特点优点：简便、精确，进样量的多少与测定结果无关，操作条件（如流速，柱温）的变化对定量结果的影响较小。但由于液相色谱所用检测器为选择性检测器，对很多组分没有响应，因此液相色谱法较少使用归一化法。%100iiiAAwî学生实训p实训注意事项：Ø如果峰高超出检测器检测范围，可以将甲苯溶液进行稀释。Ø如果有组分未能完全分离开来，可以适当改变分离条件。Ø合理安排实验时间，团队合作精神非常重要。Ø废液的处理必须有专门的容器。Ø本项目使用有机溶剂，注意其毒性。Ø若有机溶剂进入眼睛或皮肤，应如何处理？î建立一个HPLC方法p了解样品的基本情况主要包括样品所含化合物的数目、种类（官能团）、分子量、pKa值、UV光谱图以及样品基体的性质（溶剂、填充物等）、化合物在有关样品中的浓度范围、样品的溶解度等。p明确分离目的明确分离是为了定性还是定量；是单组分还是多组分分析；定量的精密度要求有多高；本实验室现有的实验条件是什么等等。p了解样品的性质和需要的预处理高效液相色谱分离前均需进行某种形式的预处理。p检测器的选择不同的分离目的对检测的要求不同，应尽量使用紫外检测器（UV），因为目前一般的HPLC都配有这类检测器，它方便且受外界影响小。如被测化合物没有足够的UV生色团，则应考虑使用其他检测手段。î建立一个HPLC方法（续）在高效液相色谱法作为分离方法中，有80%的物质的分离依靠反相色谱来完成。在反相色谱中，水是常用的流动相弱组分，C18是常用的填充载体，重要的是选择流动相的强组分，常用的强组分有甲醇、乙腈与四氢呋喃。p分离模式的选择î建立一个HPLC方法（续）î建立一个HPLC方法（续）î甲苯的定性p问题：如何对甲苯进行定性？Ø利用已知标准样品定性联系气相色谱法的定性Ø利用检测器的选择性定性当某一被测化合物同时被两种或两种以上检测器检测时，两检测器或几个检测器对被测化合物检测灵敏度比值是与被测化合物的性质密切相关的。Ø利用紫外检测器全波长扫描功能定性全波长扫描紫外检测器检测化合物的紫外光谱图。再通过对照标准谱图的方法来识别化合物。î归一化法定量练习p用高效液相色谱法测定吲哚二羧酸中主成分的含量，已知在分析条件下所有组分都出峰，且分离完全，根据测定数据计算吲哚羧酸中主成分（出峰时间在5.7min左右）的含量。序号12345保留时间/min3.543.964.825.727.15峰面积/mV•min762011694460553251064372%47.994372532510646051169476205325106AAwi4解：î下次课程问题p叶酸是人体必须的一种物质，它能促进胎儿脑神经的发育，也能防止人体贫血，你能设计一可行的分析方案，检测某药厂的叶酸片中的叶酸的含量吗？（提示：1、可查阅文献资料；2、可参照国标。）